高灵敏度NGS-MRD评估可识别复发风险极低的ALL患者

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多项回顾性和前瞻性研究结果显示，急性淋巴细胞白血病（ALL）初始治疗后微小残留病（MRD）持续阳性或由阴性转为阳性，与其高复发率和总生存期（OS）缩短相关。虽然ALL治疗后达到MRD阴性与更好的结局相关，但达到MRD阴性并不表明患者不会出现复发。多项研究显示，常规检测为“MRD阴性”的ALL患者的复发率仍达25%。高灵敏度二代测序（NGS）MRD检测方法，其灵敏度可达1×10^‐6，比标准MFC或PCR检测方法更灵敏。既往研究表明，高灵敏度NGS在儿童ALL和接受异基因造血干细胞移植（Allo-HSCT）的ALL患者中，优于传统MRD检测手段，并改善了患者的风险分层。然而，支持在接受一线治疗的ALL成人患者中使用高灵敏度NGS进行MRD检测的数据有限。基于此，有研究者开展了相关研究，旨在评价高灵敏度NGS的MRD检测手段在新诊断ALL成人患者中的临床适用性，确定高灵敏度检测达到MRD阴性是否可有效识别复发风险极低的患者。

研究方法

该项回顾性研究旨在评价高灵敏度NGS MRD检测结果对Ph阴性ALL患者预后的影响。纳入该研究的患者于2012年2月至2018年7月接受了ALL一线治疗，方案为Hyper‐CVAD或mini‐Hyper‐CVD，并以1个诱导周期后达到完全缓解（CR）作为最佳缓解。该研究患者在治疗前具有骨髓样本，以及治疗开始后1-4.5个月期间具有至少1份治疗后缓解的骨髓样本。CR定义为骨髓中原始细胞≤5%，中性粒细胞绝对计数≥1×10⁹/L，血小板计数≥100×10⁹/L。复发定义为骨髓原始细胞复发＞5%或髓外出现AML细胞浸润。

研究结果

1.  ID样本的校准

研究者们确定了90例接受一线ALL治疗的Ph阴性ALL患者，并有足够的用于NGS MRD分析的治疗前骨髓样本。在81例患者中能够确定基线骨髓样本的克隆性（总体校准率：90%）。B细胞ALL患者的ID校准率高于T细胞ALL患者（分别为96%与60%；P＜0.001）。

2.  研究人群特征

在成功进行ID校准的81例患者中，74例患者至少有1份缓解后样本可用于NGS MRD评估。这74例具有完整ID和MRD信息的患者是本研究的主要受试者，其基线特征见表1。34例患者（46%）具有至少一种低风险基线特征，定义为低风险细胞遗传学（即亚二倍体/近三倍体、复杂细胞遗传学或KMT2A重排）、MFC显示CRLF2阳性或TP53突变。51例患者（69%）接受了基于Hyper-CVAD的治疗方案，23例患者（31%）接受了基于mini‐Hyper‐CVD的治疗方案作为ALL一线治疗。整个研究人群的中位随访时间为64个月（范围为17-103个月）。23例患者（31%）在首次CR（CR1）时接受了Allo-HSCT。在末次随访时，18例患者（25%）复发，26例患者（35%）死亡。

表1：研究人群的基线特征（N=74）

3.  MFC MRD与NGS MRD的相关性

3个不同时间点的MRD阴性率（CR时[首次诱导治疗后或治疗开始后3-4周]、治疗开始后1.5-3个月和治疗开始后3.5-4.5个月）详见图1。43例患者在首次诱导治疗后CR时有可用的MFC和NGS MRD样本，46例患者在1.5-3个月时有可用的样本，34例患者在3.5-4.5个月时有可用的样本。在这3个时间点，MFC检测的MRD阴性率分别为72%、72%和85%。进一步对121份缓解样本进行NGS MRD检测，结果显示在MFC检测为MRD阳性的28份样本中，NGS MRD检测也证实为MRD阳性。而在93份MFC检测为MRD阴性的样本中，23份因DNA/细胞不足而无法确定NGS MRD（10^-6）结果，70份可通过NGS检测归类为MRD阳性或阴性。在这70份经MFC检测为MRD阴性且可通过NGS MRD（10^-6）进行评估的样本中，32份（46%）样本经NGS检测为MRD阳性。较早时间点的MFC和NGS之间的MRD阴性的不一致率高于较晚时间点（CR时为60%，1.5-3个月时为52%，3.5-4.5个月时为25%），表明在早期进行NGS MRD评估可能更有用。

图1：不同时间点MFC和NGS的MRD状态流程图

4.  基线特征与MRD阴性的相关性

具有至少1个低风险特征的患者和不具有低风险特征的患者的NGS MRD阴性率相似（分别为24%和22%，P=0.89）。在接受基于hyper‐CVAD或mini‐hyper‐CVD的方案治疗的患者之间也在CR时观察到相似的NGS MRD阴性率（两组均为23%）。

5.  MFC MRD状态对患者预后的影响

74例NGS MRD可评价患者中，49例（66%）在CR1时达到MFC MRD阴性。其中11例（22%）MRD阴性患者在CR1时接受了Allo-HSCT。早期达到MFC MRD阴性的患者中仍有12例复发，中位至复发时间为16.3个月（范围：6.2-48.2个月）。MFC MRD阴性患者的5年累积复发率（CIR）和OS率分别为29%和68%。在接受Hyper‐CVAD或mini‐Hyper‐CVD方案治疗达到MFC MRD阴性的患者中观察到相似的复发率。

6.  NGS MRD状态对患者预后的影响

43例NGS MRD可评价患者中，10例患者（23%）在CR1时达到NGS MRD（10^-6）阴性。NGS MRD阴性与MFC MRD阴性相比能更好地预测患者持久缓解的可能性。达到NGS MRD（10^-6）阴性CR的10例患者均未出现复发（CIR率：0%），其5年OS率为90%。NGS MRD阴性较阳性患者具有更优的临床结局（5年CIR率：分别为0%和45%，P=0.04；5年OS率：分别为90%和61%，P=0.11；图2A‐B）。重要的是，MFC和NGS均为MRD阳性的患者与MFC MRD阴性但NGS MRD阳性的患者的复发率相似（5年CIR率分别为56%和39%；图3A）；两组患者的5年OS率也相似（分别为61%和62%，见图3B）。NGS MRD阴性的患者中，仅1例患者（10%）在CR1时接受了Allo-HSCT；相比之下，NGS MRD阳性的27例患者中有10例（37%）接受了Allo-HSCT。由于接受Allo-HSCT可能混淆NGS MRD结果对患者复发率的影响，研究者们在CR1时未接受Allo-HSCT的患者亚组中重复了这些分析。结果与全球人群相似，NGS MRD阴性与非移植患者的复发风险显著降低（MRD阴性与阳性患者5年CIR率为0% vs 57%；P=0.03；图4A）相关，且具有更优的长期生存的趋势（MRD阴性与阳性患者5年OS率分别为89% vs 63%；P=0.16；图4B）。

图2：NGS MRD（10^-6）状态对患者临床结局的影响：（A）CIR和（B）OS

图3：MFC MRD与NGS MRD（10^-6）状态对患者临床结局的影响：（A）CIR和（B）OS

图4：NGS MRD（10^-6）状态对非移植患者临床结局的影响：（A）CIR和（B）OS

7.  晚期时间点NGS MRD状态对患者预后的影响

总体而言，53例可评价患者中的31例（58%）在CR后1个或多个时间点达到MRD阴性。在CR后晚期时间点达到NGS MRD阴性对患者的复发率或生存期无显著影响。在CR后晚期时间点NGS MRD阴性的25例非移植患者中，5年CIR率为30%，表明在这些晚期时间点评估NGS MRD可能不足以识别复发风险极低的患者。

研究结论

该研究结果表明，早期高灵敏度NGS MRD评估为基于MFC的MRD标准方法增加了临床相关预后信息，可识别接受一线治疗且复发风险极低且长期生存极佳的ALL患者。

参考文献

Nicholas J Short, Hagop M Kantarjian, Farhad Ravandi, et al. High-sensitivity next-generation sequencing MRD assessment in ALL identifies patients at very low risk of relapse. Blood Adv (2022) 6 (13): 4006–4014.