学术速递 | 国家中心、北大血研所张晓辉教授团队：IL-35及其受体表达降低影响巨核细胞分化发育在ITP发病机制中的作用

研究背景

先前的研究结果表明，与健康对照组相比， ITP患者的血浆和骨髓IL-35水平显著下降。IL-35是IL-12家族的一种抑制性细胞因子，由一条α链（p35亚基）和一条β链组成（Epstein-Barrvirus-induced gene 3）。IL-35由多种免疫细胞产生，如调节性T细胞（Tregs）和调节性B细胞（Bregs）。一种新型的Treg，即产生IL-35的Treg（iTr35）（IL-35+CD4+IL-10-TGFβ-Foxp3-），已被发现是IL-35的主要来源。IL-35通过IL-35受体发挥作用，IL-35受体由IL-12Rβ2和gp130的异二聚体或每条链的同源二聚体组成。IL-35主要通过抑制T细胞增殖和分化以及诱导幼稚T细胞转化为Treg细胞来有效限制炎症反应。IL-35还可以抑制T细胞分泌炎性细胞因子，如IL-12、干扰素-α和IL-17。此外，IL-35抑制B细胞的扩增并诱导产生IL-10的B细胞。

既往有些研究调查了IL-35在ITP中的作用。ITP患者血浆IL-35水平与外周Tregs数量和血小板计数呈正相关，与Th1细胞数量呈负相关。此外，IL-35降低ITP患者CD4+T细胞的数量，但可诱导Tregs的增殖。静脉注射免疫球蛋白和大剂量地塞米松治疗后，ITP患者的外周IL-35数量上调。此外，治疗取得完全反应的ITP患者的血浆IL-35浓度恢复正常，但在无反应的患者中没有得到纠正。然而，IL-35在ITP中的潜在机制尚不清楚。

研究过程

1、ITP患者IL-35水平降低

与健康对照组相比，ITP患者外周血和骨髓IL-35水平下降，仅用TPO将ITP患者和健康对照的骨髓CD34+细胞分化为巨核细胞，在巨核生成过程中，两组巨核细胞的IL-35受体（IL-12Rα2和gp130）均逐渐被诱导，但ITP组IL-12Rα2和gp130水平较低。

2、IL-35体外促进巨核细胞分化发育

体外用TPO联合IL-35将骨髓CD34+细胞诱导分化为巨核细胞，与单用TPO组相比，IL-35增加了巨核细胞IL-35受体表达。此外，IL-35在体外促进巨核细胞生成，增加巨核细胞集落数，增加高倍体巨核细胞比例，促进血小板生成，且生成的血小板功能正常。IL-35增加巨核细胞Akt磷酸化水平，Akt磷酸化抑制剂阻碍了IL-35介导的巨核细胞生长发育，减少血小板生成，表明IL-35可以通过Akt途径增强巨核细胞的增殖和分化。

3、ITP-MSC诱导iTr35的能力受损

然后，我们研究了ITP患者IL-35减少的潜在原因。iTr35细胞已被证明是分泌IL-35的主要细胞类型。CD8+Tregs、Bregs和耐受性树突状细胞也是IL-35的细胞来源。ITP患者骨髓iTr35的比例明显较低。将CD4+T细胞与来自健康对照组和ITP患者的MSC共培养。ITP组iTr35细胞的百分比低于对照组。这些结果表明，ITP-MSCs诱导iTr35的能力受损。

4、Iguramod刺激巨核细胞分化发育

体外将患者骨髓CD34+细胞用iguratimod或IL-35分化为巨核细胞。Iguramod增加了巨核细胞IL-12R和gp130的表达。Iguratimod同样可以促进ITP小鼠骨髓巨核细胞IL-12R和gp130的表达。Iguratimod促进巨核细胞集落形成，增加血小板生成，Akt磷酸化抑制剂阻碍了Iguratimod介导的巨核细胞生长发育，减少血小板生成。

5、Iguratimod治疗激素耐药/复发ITP患者

本研究进行一项回顾性分析，以评估Iguratimod治疗激素耐药/复发ITP患者的疗效和安全性。我们的研究最终纳入了68名激素耐药/复发ITP患者。42/68名患者（62%）获得初始反应，25/68名患者（37%）达到完全反应。在达到初始反应的患者中，中位反应时间为28天。随访6个月，7/42（17%）患者复发，35/68（51%）患者达到持续反应，患者出血症状明显减轻。没有患者发生4级或更严重的不良事件。Iguratimod最常见的不良事件是ALT升高（7/68，10%）、胃肠道疾病（6/68，9%）和恶心（5/68，7%）。